Đánh giá về Dntp Là Gì – Kỹ Thuật Giải Trình Tự Sanger
Xem nhanh
Năm 1977,
Frederick Sanger đã phát triển một phương pháp mới để giải trình tự
DNA dựa trên phương pháp PCR kết dứt chuỗi. Với phương pháp này,
Sanger đã được trao giải thưởng Nobel về hóa học năm 1980 và ngày
nay phương pháp này vẫn được gọi là phương pháp giải trình tự DNA
Sanger, trở thành một phương pháp tiêu chuẩn trong lĩnh vực di
truyền.Bài viết trình bày sơ lược về các bước chính của phương pháp
giải trình tự DNA Sanger cổ điển và giải trình tự DNA Sanger tự
động đang được dùng hiện nay.Năm 1977, Frederick Sanger đã tăng
trưởng một giải pháp mới để giải trình tự DNA dựa trên giải pháp
PCR kết dứt chuỗi. Với chiêu thức này, Sanger đã được trao phần
thưởng Nobel về hóa học năm 1980 và thời nay chiêu thức này vẫn
được gọi là giải pháp giải trình tự DNA Sanger, trở thành một chiêu
thức tiêu chuẩn trong nghành di truyền. Bài viết trình diễn sơ lược
về những bước chính của giải pháp giải trình tự DNA Sanger cổ xưa
và giải trình tự DNA Sanger tự động hóa đang được dùng lúc bấy giờ
.Bạn đang xem: dntp là gì
1. PCR kết thúc chuỗi
(chain-termination PCR)Trình tự DNA quan tâm được dùng để
thực hiện phản ứng PCR đặc biệt gọi là PCR kết thúc chuỗi. Phương
pháp PCR này có điểm khác biệt chính là việc bổ sung các nucleotide
(dNTPs) biến đổi được gọi là dideoxyribonucleotide (ddNTPs). Trong
bước kéo dài, DNA polymerase thêm dNTP vào chuỗi DNA bằng cách xúc
tác cho sự hình thành liên kết phosphodiester giữa nhóm 3″-OH tự do
của nucleotide cuối cùng và 5″-phosphate của tiếp theo. Nhưng trong
PCR kết thúc chuỗi, người dùng một tỷ lệ thấp các ddNTP cùng với
các dNTP thông thường trong phản ứng PCR. ddNTP thiếu nhóm 3″-OH
cần thiết cho sự hình thành liên kết phosphodiester; do đó, khi DNA
polymerase kết hợp một ddNTP một cách ngẫu nhiên, quá trình kéo dài
sẽ kết thúc. Kết quả của PCR kết thúc chuỗi là hàng triệu bản sao
oligonucleotide của chuỗi DNA quan tâm, có độ dài ngẫu nhiên.Trong
giải Sanger trình tự cổ điển, bốn phản ứng PCR được thiết lập, mỗi
với chỉ một loại duy nhất của ddNTP (ddATP, ddTTP, ddGTP, và ddCTP)
được trộn lẫn với dNTP thường. Trong giải trình tự Sanger tự động,
tất cả các ddNTP được trộn trong một phản ứng duy nhất và mỗi ddNTP
được gắn huỳnh quang duy nhất.
2. Tách kích thước bằng điện di gelTrong bước thứ
hai, các sản phẩm PCR được phân tách bằng kích thước thông qua điện
di gel. Trong quá trình điện di, DNA tích điện âm, vì vậy sẽ được
kéo về phía điện cực dương; và các đoạn DNA có cùng điện tích trên
một đơn vị khối lượng, tốc độ di chuyển của sẽ được xác định theo
kích thước. Một đoạn DNA càng ngắn thì sẽ di chuyển càng nhanh. Kết
quả là các DNA sẽ được sắp xếp theo thứ tự về kích thước.Trong giải
Sanger trình tự cổ điển, các đoạn từ bốn phản ứng PCR được chạy
điện di riêng biệt. Điều này cho phép xác định chuỗi kết thúc với
ddNTP nào.
Trình tự DNA quan tâm được dùng để thực hiện phản ứng PCR đặc biệt gọi là PCR kết thúc chuỗi. Phương pháp PCR này có điểm khác biệt chính là việc bổ sung các nucleotide (dNTPs) biến đổi được gọi là dideoxyribonucleotide (ddNTPs). Trong bước kéo dài, DNA polymerase thêm dNTP vào chuỗi DNA bằng cách xúc tác cho sự hình thành liên kết phosphodiester giữa nhóm 3″-OH tự do của nucleotide cuối cùng và 5″-phosphate của tiếp theo. Nhưng trong PCR kết thúc chuỗi, người dùng một tỷ lệ thấp các ddNTP cùng với các dNTP thông thường trong phản ứng PCR. ddNTP thiếu nhóm 3″-OH cần thiết cho sự hình thành liên kết phosphodiester; do đó, khi DNA polymerase kết hợp một ddNTP một cách ngẫu nhiên, quá trình kéo dài sẽ kết thúc. Kết quả của PCR kết thúc chuỗi là hàng triệu bản sao oligonucleotide của chuỗi DNA quan tâm, có độ dài ngẫu nhiên.Trong giải Sanger trình tự cổ điển, bốn phản ứng PCR được thiết lập, mỗi với chỉ một loại duy nhất của ddNTP (ddATP, ddTTP, ddGTP, và ddCTP) được trộn lẫn với dNTP thường. Trong giải trình tự Sanger tự động, tất cả các ddNTP được trộn trong một phản ứng duy nhất và mỗi ddNTP được gắn huỳnh quang duy nhất.Trong bước thứ hai, các sản phẩm PCR được phân tách bằng kích thước thông qua điện di gel. Trong quá trình điện di, DNA tích điện âm, vì vậy sẽ được kéo về phía điện cực dương; và các đoạn DNA có cùng điện tích trên một đơn vị khối lượng, tốc độ di chuyển của sẽ được xác định theo kích thước. Một đoạn DNA càng ngắn thì sẽ di chuyển càng nhanh. Kết quả là các DNA sẽ được sắp xếp theo thứ tự về kích thước.Trong giải Sanger trình tự cổ điển, các đoạn từ bốn phản ứng PCR được chạy điện di riêng biệt. Điều này cho phép xác định chuỗi kết thúc với ddNTP nào.
Xem thêm: download game d’gunners mod apk
Bạn đang đọc: dntp là gì – Kỹ Thuật Giải Trình Tự Sanger
3. Phân tích & xác định trình tự DNABước cuối cùng
là đọc gel để xác định chuỗi DNA đầu vào. Do DNA polymerase tổng
hợp DNA theo hướng 5’ đến 3″, mỗi ddNTP cuối đoạn DNA sẽ tương ứng
với một nucleotide cụ thể (ví dụ, đoạn ngắn nhất phải kết thúc ở
nucleotide đầu tiên từ đầu 5 “, đoạn ngắn thứ hai phải chấm dứt ở
nucleotide thứ hai từ đầu 5 “, v.v.) Do đó, bằng cách đọc các dải
gel từ nhỏ nhất đến lớn nhất, chúng ta có thể xác định trình tự
đoạn DNA 5” đến 3’.Trong giải Sanger trình tự cổ điển, Cần phải đọc
gel cùng một lúc của 4 phản ứng, di chuyển dưới lên trên. Ví dụ:
nếu dải dưới cùng được tìm thấy trong băng điện di tương ứng với
ddGTP, thì nucleotide đầu tiên từ đầu 5 “của chuỗi ban đầu có gốc
guanine (G).Trong giải trình tự Sanger tự động. Hệ thống detector
gồm các camera có chùm tia laser đi qua nó để ghi nhận tín hiệu
huỳnh quang một cách chính xác. Tia laser kích thích huỳnh quang
được gắn vào cuối mỗi đoạn DNA và máy tính ghi nhận ánh sáng phát
ra. Do bốn ddNTP được gắn các loại huỳnh quang khác nhau, tín hiệu
huỳnh quang phát ra cho biết ddNTP cuối thuộc loại nào. Dữ liệu đầu
ra lưu lại thành một cường độ đỉnh sáng (peak) trong biểu đồ. Từ
biểu đồ của các peak, máy sẽ phân tích các đỉnh tương ứng với nhau
và phân tích thành trình tự của đoạn DNA.Ứng
dụngGiải trình tự Sanger hiện nay có thể thực hiện giải
với các đoạn DNA tương đối dài khoảng 900 -1200 cặp base trên mỗi
lần giải. Kỹ thuật này đang nắm giữ vai trò quan trọng trong việc
chuẩn đoán các bệnh di truyền, sàng lọc tiền hôn nhân, nghiên cứu
các tác nhân nhiễm mới,…(Tham khảo:
https://www.sigmaaldrich.com/)Trong giải trình tự Sanger tự động
hóa, toàn bộ những oligonucleotide được chạy điện di mao quản trong
máy giải trình tự. Bước ở đầu cuối là đọc gel để xác lập chuỗi DNA
nguồn vào. Do DNA polymerase tổng hợp DNA theo hướng 5 ’ đến 3 “,
mỗi ddNTP cuối đoạn DNA sẽ tương ứng với một nucleotide đơn cử ( ví
dụ, đoạn ngắn nhất phải kết thúc ở nucleotide tiên phong từ đầu 5
“, đoạn ngắn thứ hai phải chấm hết ở nucleotide thứ hai từ đầu 5 “,
v.v. ) Do đó, bằng cách đọc những dải gel từ nhỏ nhất đến lớn nhất,
tất cả chúng ta hoàn toàn có thể xác lập trình tự đoạn DNA 5 ” đến
3 ’. Trong giải Sanger trình tự cổ xưa, Cần phải đọc gel cùng một
lúc của 4 phản ứng, vận động và di chuyển dưới lên trên. Ví dụ :
nếu dải dưới cùng được tìm thấy trong băng điện di tương ứng với
ddGTP, thì nucleotide tiên phong từ đầu 5 ” của chuỗi bắt đầu có
gốc guanine ( G ). Trong giải trình tự Sanger tự động hóa. Hệ thống
detector gồm những camera có chùm tia laser đi qua nó để ghi nhận
tín hiệu huỳnh quang một cách đúng mực. Tia laser kích thích huỳnh
quang được gắn vào cuối mỗi đoạn DNA và máy tính ghi nhận ánh sáng
phát ra. Do bốn ddNTP được gắn những loại huỳnh quang khác nhau,
tín hiệu huỳnh quang phát ra cho biết ddNTP cuối thuộc loại nào. Dữ
liệu đầu ra lưu lại thành một cường độ đỉnh sáng ( peak ) trong
biểu đồ. Từ biểu đồ của những peak, máy sẽ nghiên cứu và phân tích
những đỉnh tương ứng với nhau và nghiên cứu và phân tích thành
trình tự của đoạn DNA.Giải trình tự Sanger lúc bấy giờ hoàn toàn có
thể thực thi giải với những đoạn DNA tương đối dài khoảng chừng 900
– 1200 cặp base trên mỗi lần giải. Kỹ thuật này đang nắm giữ vai
trò quan trọng trong việc chuẩn đoán những bệnh di truyền, sàng lọc
tiền hôn nhân gia đình, nghiên cứu và điều tra những tác nhân nhiễm
mới, … ( Tham khảo : https://www.sigmaaldrich.com/ )
Các câu hỏi về dntp là gì
Nếu có bắt kỳ câu hỏi thắc mắt nào vê dntp là gì hãy cho chúng mình biết nhé, mõi thắt mắt hay góp ý của các bạn sẽ giúp mình cải thiện hơn trong các bài sau nhé <3 Bài viết dntp là gì ! được mình và team xem xét cũng như tổng hợp từ nhiều nguồn. Nếu thấy bài viết dntp là gì Cực hay ! Hay thì hãy ủng hộ team Like hoặc share. Nếu thấy bài viết dntp là gì rât hay ! chưa hay, hoặc cần bổ sung. Bạn góp ý giúp mình nhé!! [add_mota]
Các Hình Ảnh Về dntp là gì
Các hình ảnh về dntp là gì đang được Moviee.vn Cập nhập. Nếu các bạn mong muốn đóng góp, Hãy gửi mail về hộp thư [email protected] Nếu có bất kỳ đóng góp hay liên hệ. Hãy Mail ngay cho tụi mình nhé
Tìm thêm kiến thức về dntp là gì tại WikiPedia
Bạn nên tra cứu thêm thông tin về dntp là gì từ trang Wikipedia.◄ Tham Gia Cộng Đồng Tại???? Nguồn Tin tại: https://hoatuoibattu.vn/
???? Xem Thêm Chủ Đề Liên Quan tại : https://hoatuoibattu.vn/hoi-dap/
